2003.11.05
発芽型バキュロウイルス上への小胞体膜タンパク質の発現法とその応用
バキュロウイルス発現系は膜タンパク質を含めた様々な蛋白質の大量発現に利用されている。またバキュロウイルスは昆虫細胞に感染後、核内封入体ウイルスとして増殖し、感染するために発芽型ウイルス（Budded virus, BV）となって細胞外に出ることが知られている。今回我々は通常小胞体やゴルジ体の膜上に存在し、細胞内コレステロール調節に関わるSREBP-2 (Sterol regulatory element binding protein-2)やSCAP (SREBP cleavage-activating protein)を用いて発現を行った。組み換えバキュロウイルスを感染させ、ショ糖密度勾配遠心等により組み換え膜タンパク質の発現を確認したところ、昆虫細胞膜画分に加えて、BV上に分解や凝集の少ない形で発現していることが認められた。
またSCAPを発現させたBVを抗体スクリーニング用の抗原として用いたところ、イムノブロットや免疫染色に有効なモノクローナル抗体が得られた。以上のことから、BVへの発現法は、一般に大量発現が困難な膜タンパク質の解析を進める上で有効な手段となる可能性が示された。
Urano, Y., Yamaguchi, M., Fukuda, R., Masuda, K., Takahashi, K., Uchiyama, Y., Iwanari, H., Jiang, SY., Naito, M., Kodama, T., Hamakubo T., A novel method for viral display of ER membrane proteins on budded baculovirus, Biochemical and Biophysical Research Communications, 308 (2003) 191-196.